ELISA試劑盒實驗稀釋血清的步驟：
先把蛋白稀釋一定的倍數，比如說10倍、20倍稀釋（這樣可以大體確定一個參數），將抗原進行一系列稀釋包被微量反應板，再用一定稀釋度的陽性參考血清和陰性參考血清進行孵育后洗滌，再加酶結合物進行反應，經孵育洗滌后，加底物溶液顯色，終止反應后分別測定O.D值，選擇O.D值≥1.0的那個抗原稀釋度為zui適包被濃度。一般總是要選擇那個O.D值稍大于1.0，而不選擇小于1.0的抗原濃度。陰性參考血清O.D值要求<0.1-0.2。也就是要求陽性參考血清和陰性參考血清的O.D值有明顯差別。
在ELISA試劑盒實驗血清為什么要稀釋？有兩個原因：
1）競爭抑制比較明顯，應稀釋競爭物；
2）血清中含有的性腺激素比較低，應該濃縮才對。
血清稀釋用普通的PBS即可，可加1％的BSA，能有效降低ELISA本底，當然如果你嫌麻煩我覺得用生理鹽水替代PBS關系也不大。不管你是用直接競爭還是間接競爭，血清的稀釋倍數肯定要事先確定，但也不用一點點，你做一個預試驗即可，選擇OD在1.0左右的稀釋倍數，即你的競爭ELISA中陰性孔OD在1.0，這樣作出來的曲線比較敏感。